目的分析武汉市病原学检测阴性肺结核的诊断现状，为提高病原学阴性肺结核的诊断质量提供依据。方法从1个市级和2个区级定点医院整群抽取2019年1月1日至2月28日登记报告并完成治疗的241例病原学阴性肺结核患者，复核抽取患者的病案资料、胸部影像学检查和实验室检查结果，分析病原学检测阴性肺结核患者接受病原学检查及影像学检查质量。结果88.8%（214/241）患者符合病原学阴性肺结核诊断依据，96.3%（232/241）患者胸部影像学检查与原诊断结果判读一致，开展痰涂片检查、痰培养检查和分子生物学检测的患者分别占97.9%（236/241）、73.9%（178/241）、65.6%（158/241）。开展抗结核抗体检测、结核菌素皮肤试验、γ干扰素释放试验和诊断性抗感染治疗的患者分别占54.8%（132/241）、46.5%（112/241）、26.1%（63/241）和53.1%（128/241）。市级痰培养检查率高于中心城区和远城区，中心城区高于远城区，市级分子生物学检测率高于中心城区和远城区，差异有统计学意义（P<0.001）；抗结核抗体检测率市级低于中心城区，差异有统计学意义（P<0.001），诊断性抗感染治疗率中心城区高于市级和远城区，市级高于远城区，差异有统计学意义（P<0.001）。结论应进一步规范市区级结核病定点医院病原学检测阴性肺结核的诊断行为，市级需提高诊断性抗感染治疗和辅助检查比例，区级需增加实验室病原学检查的频次和项目。