目的针对铜绿假单胞菌毒力基因exoS，建立一种实时荧光重组酶聚合酶扩增（RPA）技术检测方法，并评价该方法的特异性、灵敏度及实用性。方法根据铜绿假单胞菌毒力基因exoS的特异性保守区域，设计RPA特异性引物和探针，对提取的目标DNA进行检测， 确定RPA方法的特异性和灵敏度； 建立实时荧光定量PCR(qPCR)法，对目标DNA进行检测，比对不同检测方法对铜绿假单胞菌的检出限；通过临床样本性能验证试验，进一步确定RPA技术检测铜绿假单胞菌的可行性。结果建立的RPA检测方法特异性良好，仅对铜绿假单胞菌有特异扩增曲线，对其他细菌无特异扩增曲线；RPA方法检测病原菌的灵敏度为 5×10 2 cfu/mL，该方法与qPCR法检出限一致且结果可靠；RPA方法检测时间仅需30 min，明显短于传统方法的检测时间。结论该研究建立的铜绿假单胞菌RPA检测方法特异性强、灵敏度高，相对于传统检测方法明显缩短检测时间， 可用于临床标本中铜绿假单胞菌的快速检测。