目的统计院内耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌（CRKP）检出率，分析CRKP的主要耐药基因及毒力基因，了解其感染菌株分子流行病学机制。方法回顾性分析2020-2023年广东省第二中医院（下称该院）CRKP检出率，并收集该院2022年7-12月共计84株CRKP,统计菌株临床资料，PCR扩增相应耐药基因及毒力基因，改良碳青霉烯灭活（mCIM）试验检测碳青霉烯酶。结果2020-2023年该院年CRKP检出率较高，均＞46.00%；收集2022年7-12月临床分离84例非重复CRKP菌株，呼吸道来源样本最多，占55.95%，患者以针灸康复科为主，占34.52%；药敏试验显示对多种头孢类及超广谱β内酰胺类药物高度耐药，仅对替加环素及多黏菌素E呈现较高敏感性；mCIM试验阳性率为84.52%（71/84），其余15.48%结果为中性，未能判断是否产碳青霉烯酶。73株检出携带碳青霉烯酶基因，占86.90%，共涉及4种基因型，blaKPC、blaNDM、blaIMP、blaOXA-48的检出率分别为83.33%、2.38%、1.19%、1.19%；其中1株同时携带blaKPC及blaNDM基因，同时检出多种β内酰胺酶，blaSHV、blaTEM、blaCTX-M-9、blaCTX-M-1的检出率分别为96.43%、78.57%、64.29%、2.38%，5种毒力基因blaiucA、blarmpA2、blairoB、blapeg-334、blarmpA检出率分别为42.86%、41.67%、27.38%、3.57%、2.38%；同时携带3种及以上毒力基因的菌株占比为17.85%（15/84）。结论该院CRKP检出率较高，耐药情况严峻，耐药基因以肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶（KPC）为主；出现较高比例的耐碳青霉烯类高毒力肺炎克雷伯菌(CR-hvKP）菌株，感染防控情况不容乐观。应进一步加强院内感控措施，科学合理规范用药。