目的分析2019-2023年某三甲医院临床分离的耐碳青霉烯类肠杆菌（CRE）的临床分布特点、耐药情况及其同源性，为临床合理用药和医院感染防控提供依据。方法回顾性分析2019-2023年该院临床分离的非重复CRE菌株，应用WHONET5.6软件分析CRE的检出率、临床分布特点及病原菌耐药性，并收集2022年该院临床分离的CRE菌株为研究对象，通过聚合酶链反应扩增及序列分析检测其耐药基因表达及医院内感染克隆株的同源性。结果2019-2023年该院临床标本中共检出非重复CRE 455株，检出率为6.00%，逐年分别为2019年72株（6.59%），2020年91株（8.31%），2021年117株（7.99%），2022年78株（4.76%），2023年97株（4.24%），2020-2023年，CRE检出率呈下降趋势（P＜0.05）。CRE菌株中占比前两位的菌株分别为耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌（CRKP）324株（71.21%），耐碳青霉烯大肠埃希菌（CREC）57株（12.53%），2021-2023年CRKP检出率呈下降趋势，2021-2023年CREC检出率呈上升趋势（P＜0.05）；菌株主要来自重症医学科、老年科及神经内科；其中大部分CRE菌株分离自痰标本，检出率为67.96%，其次是尿液标本，检出率为21.97%。CRE对临床常见的抗菌药物具有非常高的耐药性，对厄他培南、亚胺培南的耐药率分别为94.32%、96.37%。78株CRE菌株中共检测出blaKPC-2基因型55株（70.51%），blaNDM基因型14株（17.95%）；CRKP MLST分型ST11型检出率为68.89%（31/45）。结论该院CRE检出率呈下降趋势，但菌株耐药性仍然较高，CRE菌株中以CRKP为主，主要携带blaKPC-2基因，且以ST11型为主，临床科室（尤其是重症医学科）应结合药敏试验结果合理选择抗菌药物进行治疗并加强医院内管理，进一步遏制CRE增长。