目的探讨妊娠期糖尿病（GDM）患者血清同型半胱氨酸（Hcy）、维生素D水平与不良妊娠结局的关系。方法选取2022年5月至2023年10月该院收治的136例GDM患者，检测所有研究对象的血清Hcy、25-羟维生素D［25(OH)D］水平。根据不同妊娠结局，将136例GDM患者分为妊娠结局不良组（25例）与妊娠结局良好组（111例）。对比两组患者的血清Hcy、25(OH)D水平。采用受试者工作特征（ROC）曲线预测血清Hcy、25(OH)D对GDM患者发生不良妊娠结局的价值，采用多因素Logistic回归分析探讨不良妊娠结局的影响因素。结果妊娠结局不良组血清Hcy水平高于妊娠结局良好组（P＜0.05），25(OH)D水平低于妊娠结局良好组（P＜0.05）。血清Hcy、25(OH)D预测GDM患者发生不良妊娠结局的曲线下面积（AUC）分别为0.813（95%CI：0.768~0.863），0.744（95%CI：0.694~0.794），二者联合预测的AUC为0.917（95%CI：0.871~0.966）。妊娠结局不良组孕期增重、糖尿病家族史比例高于妊娠结局不良组（P＜0.05）。多因素Logistic回归分析显示，孕期增重（OR=2.056，95%CI：1.238~3.417），糖尿病家族史（OR=1.754，95%CI：1.202~2.561），血清Hcy≥24.61 μmol/L（OR=3.959，95%CI：1.936~8.096），血清25(OH)D≤38.10 μg/L（OR=2.951，95%CI：1.557~5.590）是GDM患者发生不良妊娠结局的影响因素（P＜0.05）。结论高Hcy水平、低25(OH)D水平与GDM患者发生不良妊娠结局有一定联系，二者联合检测可作为预测GDM患者发生不良妊娠结局的生物标志物。