目的分析瞬时弹性成像技术联合血清β-连环蛋白（β-catenin）、糖类抗原125（CA125）、α-L-岩藻糖苷酶（AFU）对非酒精性脂肪肝（NAFLD）患者肝纤维化程度的诊断价值。方法选取2022年1月至2023年12月该院收治的130例NAFLD患者，均行活性组织检查并根据检查结果分为无纤维化组（36例）、轻度组（64例）和中重度组（30例），合并轻度组和中重度组为纤维化组（94例）。对患者进行瞬时弹性成像检查，检测血清β-catenin、CA125、AFU水平，收集患者的一般资料。采用多因素Logistic回归分析NAFLD患者肝纤维化加重的影响因素；采用Spearman相关分析不同检查手段结果与肝纤维化程度的相关性；采用受试者工作特征（ROC）曲线分析不同检查手段对NAFLD患者肝纤维化程度的诊断价值。结果纤维化组年龄及β-catenin、CA125、AFU水平高于无纤维化组（P<0.05）。中重度组年龄、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、谷氨酰转肽酶（GGT）、肝硬度值（LSM）、β-catenin、CA125、AFU高于轻度组，血小板计数（PLT）低于轻度组（P<0.05）。AST、ALT、GGT、LSM、β-catenin、CA125、AFU是使NAFLD患者肝纤维化加重的危险因素（P<0.05）。LSM、β-catenin、CA125、AFU与肝纤维化程度呈正相关（P<0.05）。与瞬时弹性成像、β-catenin、CA125、AFU单一检查相比，联合检查的曲线下面积和灵敏度最高（P<0.05），且联合检查也具有较高的准确度。结论NAFLD肝纤维化患者的LSM、β-catenin、CA125、AFU水平高于无纤维化的NAFLD患者，且中重度纤维化患者的LSM、β-catenin、CA125、AFU高于轻度纤维化患者，联合瞬时弹性成像技术与血清β-catenin、CA125、AFU检测可较好的诊断中重度纤维化NAFLD患者，诊断能力接近于活检。