目的评价基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）对不同肠杆菌药敏及耐药性的鉴定效果，以指导临床合理用药。方法收集13株肠杆菌科耐药菌株和2株敏感质控菌株进行预实验，分别以头孢噻肟、氨苄西林、美罗培南、头孢吡肟、哌拉西林孵育各耐药和敏感菌株，以获得MALDI-TOF MS中各β-内酰胺类抗菌药物的检测特征峰。随后采用预实验的实验条件，分别使用MALDI-TOF MS和传统药敏方法（微量肉汤稀释法）对临床分离的119株肠杆菌科菌株进行批量检测（大肠埃希菌89株，肺炎克雷伯菌30株），评估MALDI-TOF MS检测结果与传统药敏方法的符合率。结果预实验发现，MALDI-TOF MS中相对分子质量410、491处峰是头孢噻肟的特征峰，386、394、726处峰是氨苄西林的特征峰，402处峰是美罗培南的特征峰，481、499处峰是头孢吡肟的特征峰，哌拉西林空白对照中518处［M+H］ +分子峰出现自身水解现象，无意义，故后续实验未继续考察。批量检测比对中，头孢噻肟鉴定总符合率为95.7%（111/116），氨苄西林总符合率为90.0%（99/110），美罗培南总符合率为94.6%（105/111），头孢吡肟总符合率为93.8%（90/96）。结论MALDI-TOF MS与传统药敏方法检测肠杆菌对4种β-内酰胺类抗菌药物药敏及耐药性的符合率均大于90.0%，可用于临床β-内酰胺类抗菌药物细菌耐药性的检测，以指导临床的合理用药。