2022年度南通市卫生健康委员会科研课题项目(MSZ2022030)
目的探究宫颈癌细胞环状RNA核受体相互作用蛋白1(circNRIP1)表达对CD8 +T细胞的耗竭的影响及机制。方法采用实时定量PCR检测circNRIP1在宫颈上皮细胞HCerEpic和宫颈癌细胞C-33 A、Hela、SiHa、CS121中的表达水平,将C-33 A细胞分为Vector组、circNRIP1组和circNRIP1+miR-138-5p组,CS121细胞分为sh-NC组、sh-circNRIP1组和sh-circNRIP1+miR-138-5p inhibitor。提取人外周血CD8 +T细胞,Vector组和circNRIP1组C-33 A细胞与CD8 +T细胞共孵育24 h(CD8 +T/Vector组和CD8 +T/circNRIP1组),sh-NC组和sh-circNRIP1组CS121细胞与CD8 +T细胞共孵育24 h(CD8 +T/sh-NC组和CD8 +T/sh-circNRIP1组)。采用细胞毒性实验检测CD8 +T细胞的杀伤能力,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清白细胞介素(IL)-2、γ干扰素(IFN-γ)和肿瘤坏死因子(TNF)-α水平,流式细胞术检测CD8 +T细胞程序性死亡受体1(PD1)、T细胞免疫球蛋白及黏蛋白分子-3(TIM3)、淋巴细胞活化因子3(LAG3)表达水平。利用双荧光素酶报告基因实验验证circNRIP1和miR-138-5p的靶向关系,以及miR-138-5p和PD-L1的靶向关系。结果C-33 A、Hela、SiHa、CS121细胞中circNRIP1表达水平显著高于HCerEpic细胞(P<0.05)。CD8 +T细胞对circNRIP1组C-33 A细胞杀伤能力低于其对Vector组细胞的杀伤。CD8 +T/circNRIP1组CD8 +T细胞分泌IL-2、IFN-γ和TNF-α水平显著低于CD8 +T/Vector组CD8 +T细胞(P<0.05),CD8 +T/circNRIP1组CD8 +T细胞PD-1、LAG-3、TIM-3显著高于CD8 +T/Vector组CD8 +T细胞(P<0.05)。CD8 +T细胞对sh-circNRIP1组CS121细胞杀伤能力高于其对sh-NC组细胞的杀伤(P<0.05)。CD8 +T/sh-circNRIP1组CD8 +T细胞分泌IL-2、IFN-γ和TNF-α水平显著高于CD8 +T/sh-NC组(P<0.05),CD8 +T/sh-circNRIP1组CD8 +T细胞PD-1、LAG-3、TIM-3显著低于CD8 +T/sh-NC组(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-138-5p为circNRIP1的靶基因,PD-L1为miR-138-5p的靶基因。结论circNRIP1可通过上调PD-L1的表达而诱导CD8 +T细胞的耗竭。
严铃铃,张小霞,曹晓莉 △. circNRIP1上调宫颈癌细胞PD-L1表达诱导CD8 +T细胞的耗竭研究[J].《国际检验医学杂志》编辑部,2025,(12):1485-1491