目的探讨miR-486-5P对缺氧/复氧(H/R)后H9c2心肌细胞铁死亡的影响，并分析其作用机制。方法以H9c2心肌细胞为研究对象，用氯化钴(CoCl2)及新鲜培养基建立H/R损伤模型。将细胞分为对照组、H/R组、H/R+miR-486-5P mimic NC组、H/R+miR-486-5P mimic组、H/R+miR-486-5P inhibitor NC组和H/R+miR-486-5P inhibitor组。采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞miR-486-5P相对表达水平，CCK-8法检测细胞活力，比色法检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)活性、谷胱甘肽(GSH)、Fe 2+和丙二醛(MDA)水平，2′,7′-二氯二氢荧光素二乙酸酯（DCFH-DA）荧光探针法测定细胞活性氧(ROS)水平，JC-1法检测细胞线粒体膜电位(MMP)，Western blot检测Akt/mTOR信号通路蛋白和铁死亡相关蛋白溶质载体家7成员11(SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)和酰基辅酶A合成酶长链家族成员4(ACSL4)水平。结果与对照组相比，H/R组miR-486-5P水平明显下降(P<0.05)，细胞活力显著下降(P<0.05)，LDH活性、MDA、Fe 2+水平和ROS水平及ACSL4蛋白水平明显升高(P<0.05)，GSH水平、MMP、SLC7A11和GPX4水平及P-Akt/Akt和P-mTOR/mTOR明显下降(P<0.05)。经过H/R处理后，与H/R+miR-486-5P mimic NC组相比，H/R+miR-486-5P mimic组细胞活力显著上升(P<0.05)，LDH活性、MDA、Fe 2+水平、ROS水平及ACSL4蛋白水平明显降低(P<0.05)，GSH水平、MMP、SLC7A11和GPX4水平及P-Akt/Akt和P-mTOR/mTOR明显升高(P<0.05)；与H/R+miR-486-5P inhibitor NC组相比，H/R+miR-486-5P inhibitor组上述指标趋势则与之相反。结论miR-486-5P通过调控Akt/mTOR信号通路缓解H/R诱导的H9c2细胞铁死亡，从而减轻H/R导致的心肌细胞损伤。