目的探讨车叶草苷（ASP）调节超音速刺猬因子（SHH）/胶质瘤相关癌基因同源物1（GLI1）信号通路对肝细胞癌（HCC）细胞恶性进展和化疗耐药性的影响。方法采用蛋白印迹法（WB）检测HCC耐药细胞系人类肝癌细胞系（SMMC-7721）/阿霉素（ADM）和SMMC-7721细胞株系SHH、GLI1蛋白的表达；将HCC耐药细胞系SMMC-7721/ADM分为Control组、ADM组、L-ASP组（1 mmol/L ASP）、M-ASP组（2 mmol/L ASP）、H-ASP组（3 mmol/L ASP）、ASP+PM组（1 μmol/L SHH/GLI1信号通路激活剂PM）。除Control组外，每组均加入5 μg/mL ADM。采用细胞计数试剂盒（CCK8）法和平板克隆实验检测ASP对SMMC-7721/ADM细胞增殖的影响；采用Transwell实验检测ASP对SMMC-7721/ADM细胞侵袭和迁移的影响；采用流式细胞仪检测ASP对SMMC-7721/ADM细胞凋亡的影响；采用WB检测SMMC-7721/ADM细胞SHH、GLI1、增殖细胞核抗原（PCNA）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白（Bax）蛋白表达量；采用动物实验验证ASP对HCC移植瘤生长和SHH/GLI1信号通路蛋白表达的影响。结果SHH、GLI1在SMMC-7721/ADM中的表达高于SMMC-7721（P＜0.05）。L-ASP组、M-ASP组、H-ASP中，随着ASP水平的升高，SMMC-7721/ADM细胞的增殖、迁移、侵袭能力降低，SHH、GLI1、PCNA、MMP-9的表达，并促进细胞凋亡和Bax表达（P＜0.05）。SHH/GLI1信号通路激活剂PM可以逆转H-ASP处理对SMMC-7721/ADM细胞恶性进展和化疗耐药性的抑制作用（P<0.05）。ASP可以抑制HCC移植瘤的生长及SHH、GLI1的表达（P＜0.05）。结论ASP可以抑制HCC细胞恶性进展和增强化疗敏感性，其机制可能是通过抑制SHH/GLI1信号通路实现。