目的分析上海市某综合性三级甲等医院2018-2024年临床分离真菌的分布情况及耐药特征，为临床标本规范送检及合理使用抗真菌药物提供依据。方法回顾性分析上海市东方医院南院2018-2024年分离的非重复真菌菌株，采用质谱检测系统进行鉴定，结合ITS测序技术进行复核。参照2022年美国临床和实验室标准化协会推荐标准进行微量肉汤稀释法药敏试验。结果2018-2024年分离的8 220株真菌中，呼吸道标本分离菌株占65.05%，其中94.44%为念珠菌属，非白念珠菌占33.20%。对临床确诊侵袭性念珠菌及丝状真菌1 177株进行药敏试验，光滑念珠菌对棘白菌素药物的耐药率为1.1%，热带念珠菌对棘白菌素药物的耐药率为30.4%，近平滑念珠菌对氟康唑的耐药率为12.5%，曲霉复合群对抗真菌药物高度敏感。对棘白菌素耐药的热带念珠菌主要为fks1基因的T1960C突变。结论临床分离的真菌以念珠菌属为主，非白念珠菌的比例较高。对棘白菌素耐药的热带念珠菌在医院内定植后，其分离率明显增高。