目的探讨血清Toll样受体4（TLR4）、肿瘤坏死因子受体相关因子6（TRAF6）、前动力蛋白2（PK2）对新生儿坏死性小肠结肠炎（NEC）病情及预后的评估价值。方法选取该院收治的178例NEC患儿为观察组，根据Bell分期分为早期组（65例）、进展组（71例）和重症组（42例），根据预后情况分为预后良好组（127例）和预后不良组（51例）。另选择该院同期164例健康早产儿为对照组。酶联免疫吸附试验（ELISA）检测各组血清TLR4、TRAF6、PK2水平；多因素Logistic回归分析影响NEC患儿预后不良的风险因素；绘制受试者工作特征（ROC）曲线评估TLR4、TRAF6、PK2水平对预后的预测价值。结果与对照组比较，观察组血清TLR4、TRAF6水平显著升高（P＜0.05），PK2水平显著降低（P＜0.05）。与早期组和进展组相比，重症组TLR4、TRAF6水平显著升高（P＜0.05），PK2水平显著降低（P＜0.05）。预后不良组患儿血清TLR4、TRAF6水平显著高于预后良好组（P＜0.05），血清PK2水平显著低于预后良好组（P＜0.05）。血清PK2水平降低、病情为重症及血清TLR4、TRAF6水平升高是影响NEC患儿预后的危险因素（P＜0.05）。血清TLR4、TRAF6、PK2水平预测NEC患儿预后的曲线下面积（AUC）分别为0.802、0.797、0.820，联合预测的AUC为0.922，联合预测效能优于单独预测（Z三者联合-TLR4=3.443、P=0.001，Z三者联合-TRAF6=3.712、P＜0.001，Z三者联合-PK2=3.396、P=0.001）。结论血清TLR4、TRAF6、PK2水平变化与NEC患儿病情及预后密切相关，且联合检测对疾病预后预测效能较高，有潜力成为评估新生儿NEC病情及预后的生物标志物。