儿童肿瘤具有胚胎源性、空间异质性强、临床样本稀缺等特点，传统单组学与有限靶标检测难以满足精准诊断、分型与预后评估需求。随着精准医学发展，空间多组学技术可原位解析肿瘤组织内基因组、转录组、蛋白质组、代谢组等多维分子信息与空间分布特征，为揭示儿童肿瘤发生机制、挖掘诊疗靶点提供新途径；但常规成像与测序技术存在通量不足、光谱重叠、样本消耗大、数据整合难等瓶颈。DNA编码技术凭借序列可编程、精准自组装、荧光信号可调控等优势，能在微量样本中实现超高重靶标并行检测，成为突破儿童肿瘤多组学成像瓶颈的关键手段。该文系统综述空间多组学与DNA编码技术在儿童肿瘤领域的研究进展，分析现存挑战并提出优化方向，为儿童肿瘤精准诊断与转化应用提供理论参考与策略支撑。当前空间多组学已在儿童神经母细胞瘤、甲状腺癌、胶质瘤等实体肿瘤中广泛应用。空间转录组借助多重抗误差荧光原位杂交技术、数字空间分析、10×Visium等技术，实现肿瘤区域化特征、免疫细胞互作及分子亚型定位分析；空间蛋白质组依托CODEX、质谱成像等方法，完成单细胞水平多重蛋白图谱构建，助力风险分层模型开发；空间代谢组通过基质辅助激光解吸/电离质谱、解吸电喷雾电离质谱等质谱成像，揭示肿瘤边缘与核心区域代谢差异，建立精准诊断与预后评估模型。多组学融合分析可更全面刻画肿瘤微环境动态互作，但仍面临分辨率不足、海量数据解析复杂、技术标准不统一、成本高昂等问题，难以直接适配儿童微量样本的临床转化需求。而DNA编码技术以碱基互补配对为基础，通过杂化链式反应、滚环扩增技术等恒温扩增实现信号放大，结合荧光比例编码、序列编码、链置换编码等策略，突破传统荧光通道限制，实现数十至数百种靶标原位并行成像。该技术可将核酸修饰、蛋白质表达、代谢分子等信息转化为可识别DNA条形码，已成功应用于单细胞转录组、表观修饰、多重蛋白等多组学层面成像，显著提升检测通量与灵敏度，尤其适合儿童肿瘤微小样本的多维信息挖掘。然而，现有DNA编码成像仍存在操作烦琐、循环成像易致样本损伤、编码体系稳定性不足、临床验证不充分等问题，制约其在临床病理样本中的规模化应用。面向临床转化，未来应重点提升DNA编码多组学成像通量与分辨率，发展高维编码策略与超分辨成像融合方案；建立标准化实验流程与数据分析体系，降低技术门槛与成本；拓展儿童肿瘤专属标志物面板，推进大样本临床验证与智能图像分析。综上，空间多组学与 DNA 编码技术的协同应用，可精准解析儿童肿瘤空间异质性与多维分子网络，为早期诊断、分子分型、疗效监测提供创新工具，推动儿童肿瘤精准诊疗体系升级，服务 “健康中国” 战略。