目的建立基于 DNA 荧光编码微球技术的多重微小核糖核酸（miRNA）检测方法，验证其在肝母细胞瘤（HB）相关 miRNA 多重检测中的临床应用价值。方法基于计算机辅助设计（CAD）的四发夹杂交链式反应（qHCR）系统，构建四色荧光（Pacific Blue、FAM、TAMRA、Cy5）编码微球体系，通过激光共聚焦显微镜对微球的荧光编码性能、形态特征进行表征；以 HB 相关的 7 种 miRNA（miR-21、miR-26a、miR-27a、miR-122、miR-192、miR-801、miR-223）为靶标，评估方法的检出限、线性范围及特异性；并进一步在血清模拟样本中，采用该方法进行7种miRNA同时检测，验证其多重分析性能。结果成功构建四色 DNA 荧光编码微球体系，微球粒径均一，荧光信号稳定性良好。该方法对 HB 相关 miRNA 的检出限为 1.99 pmol/L（R 2＞0.97），且能同时检测 HB 组中 7 种 miRNA。结论基于 DNA 荧光编码微球的多重 miRNA 检测技术具有高灵敏度、高特异性及多重分析能力，可实现 HB 相关 miRNA 的快速多重检测，为 HB 的早期诊断和病情监测提供新的技术支撑。