目的探讨外泌体源微小RNA（miRNA）-301、miRNA-1322表达水平在胃癌诊断中的应用价值。方法选取2024年6月至2025年6月邢台市人民医院收治的50例胃癌患者为研究组，并以同期邢台市人民医院的50例体检健康者为对照组，采用实时荧光定量PCR检测外泌体miRNA表达水平，并比较两组血清外泌体miRNA-301、miRNA-1322表达水平；收集研究组临床病理资料，分析血清外泌体miRNA-301、miRNA-1322与胃癌临床特征的关系；进一步通过受试者工作特征（ROC）曲线评估其诊断效能。结果研究组血清外泌体miRNA-301、miRNA-1322表达水平高于对照组（P<0.05）。肿瘤最大径≥5 cm、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、低分化、浸润深度T3+T4、淋巴结转移的胃癌患者血清外泌体miRNA-301、miRNA-1322表达水平分别高于肿瘤最大径＜5 cm、TNM分期Ⅰ~Ⅱ期、中高分化、浸润深度T1+T2、无淋巴结转移患者（P<0.05）。ROC曲线分析显示，血清外泌体miRNA-301、miRNA-1322联合诊断胃癌的曲线下面积及95%CI为0.901（0.856~0.951），明显高于血清外泌体miRNA-301、miRNA-1322单独检测诊断的0.819（0.774~0.864）、0.787（0.742~0.837），差异有统计学意义（Z=8.924、10.580，P<0.05）。结论血清外泌体miRNA-301、miRNA-1322在胃癌患者中均呈高表达，且二者表达水平与其临床病理特征有关。血清外泌体miRNA-301、miRNA-1322可作为诊断胃癌的临床标志物，二者联合检测的诊断效能更佳。