【】目的:了解利奈唑胺非敏感肠球菌(Linezolid-nonsusceptible Enterococcus,LNSE)检出率及分布特点；分析LNSE的分子分型和主要耐药机制,为LNSE医院感染精准预防与控制提供理论依据。方法:收集2012年1月1日到2022年12月31日临床分离的LNSE 40株,对经仪器检测出的LNSE采用微量肉汤稀释法进行确认,WHONET 5.0软件用于统计分析LNSE检出率,LNSE的判断采用2022年CLSI判断标准；采用PCR法检测23S rRNA 、cfr 、optrA及L3、L4核糖体位点利奈唑胺耐药基因,并使用基因测序方法验证扩增的PCR产物；采用多位点序列分型(Multiple locus sequence typing ,MLST)分析LNSE菌株的同源性。结果:从2012年1月1日到2022年12月31日共分离鉴定肠球菌6924株,检测出LNSE菌株40株(粪肠球菌26株,屎肠球菌14株),检出率为0.58％(40/6924),其中LIE(Linezolid-intermediated Enterococcus)共28株,检出率为0.4%(28/6924)；LRE(Linezolid-resistant Enterococcus)共12株,检出率为 0.17 %(12/6924)。12株LRE 菌株的利奈唑胺最低抑菌浓度(The Minimal Inhibition Concentration ,MIC)为8-32μg/ml。40株LNSE菌株分布的科室主要为肝胆外科占25%(10/40),急诊科占17.5%(7/40),重症监护室占10%(4/40)；标本来源主要为尿液35%(14/40),胆汁20%(8/40),分泌物17.5%(7/40),血液和引流液各占7.5%(3/40)；发现耐药基因阳性的 LNSE菌株有23株,optrA基因阳性为17株,23SrRNA发生基因突变为14株。同时携带optrA基因和23SrRNA基因有8株。编码 L3核糖体蛋白rplC基因和编码 L4核糖体蛋白rplD基因以及cfr基因未发生突变,未发现任何耐药基因的LNSE有12株；40株 LNSE菌株可以分为20个不同的ST型,其中ST16是主要型别,占12.5%(5/40),ST25型占7.5%(3/40),ST506型、ST78型各占5%(2/40)。结论:LNSE菌株检出以粪肠球菌为主,LRE菌株的主要耐药机制是携带optrA基因,23S rRNA发生基因突变也参与耐药,出现了新的耐药基因表型(optrA +/23SrRNA+)。大部分LRE病例呈散发,部分菌株存在克隆传播现象。